آگوست 21

فرمت word : پایان نامه ارشد رشته کشاورزی :توليد موتاسيون در گياه نعناع فلفلی با استفاده از موتاژن EMS- قسمت 2

یاه بوده می باشد.

کلمات کلیدی: اتیل متیل سولفانات (EMS)، اجزاء اسانس، کشت درون شیشه‌ای، محیط کشت MS، نعناع فلفلی (Mentha piperita).

1-1 مقدمه:

گیاهان به عنوان یکی از اجزاء طبیعت، از دیرگاه پشتوانه غنی نیازهای بشری بوده‌اند و می‌توان با اطمینان گفت تا زمانی که بشر در این کره خاکی به سر می‌برد، به گیاهان نیاز دارد (سلیمان زاده، 1377).

در بحث گیاهان دارویی، محدودیت‌های کاشت و نگهداری آن‌ها متعدد می‌باشد که از آن جمله می‌توان به کوتاه بودن فصل کاشت و یا برداشت بعضی از گونه‌های گیاهی، کمبود زمین‌های مناسب جهت داشت، ناچیز بودن مواد موثره حاصل از گیاه و غیره تصریح نمود (ثقه الاسلام و موسوی، 1385).

یکی از راه‌های رفع این محدودیت‌ها کشت بافت گیاهی[1] می باشد. تکنیک‌های کشت بافت گیاهی درحال حاضر به عنوان یک ابزار قوی جهت رفع معضلات اساسی و کاربردی بیولوژی گیاهی درآمده می باشد.

بهره گیری از گیاهان به عنوان دارو از زمان‌های خیلی دور در معالجه بشر و دام مرسوم بوده می باشد. در حال حاضر حدود یک سوم داروهای مورد بهره گیری دارای منشاء گیاهی می‌باشند. کشورهای آسیایی بخصوص هند، چین و ایران سابقه بسیار طولانی در این زمینه دارند. این گیاهان مواد زیستی بخصوص و فعال با مقادیر بسیار کم تولید می‌کنند که تحت عنوان متابولیت‌های ثانویه نام‌گذاری می شوند. در عصر جدید، دانشمندان علوم گیاهی با بهره گیری از آخرین تکنیک‌های عملی کشت بافت گیاهی، توانسته‌اند از انواع گیاهان ترکیب‌های بسیار مفیدی را جهت مداوای بیماری‌های سخت و غیر قابل مداوا و موارد بهره گیری دیگر، بدست آورند. در طی چند دهه اخیر روش‎های متفاوتی با بهره گیری از بیوتکنولوژی[2] درزمینه پرورش محصولات گیاهی برتر ابداع شده می باشد که مانند آن‌ها می‌توان روش‌های ایجاد گونه‌های جهش یافته[3] و پلی پلوئید[4] را نام برد.

گیاهان دارویی فراوانی در کشور ما می‌رویند که بسیاری از آن‌ها مانند نعناع فلفلی دارای طیف وسیعی از خواص دارویی می‌باشند. برهمین اساس مطالعه و مطالعه گیاهان دارویی ایران با بهره گیری از ابزارهای امروزی ضروری به نظر می‌رسد. کشت سلول و بافت که به عنوان کشت درون شیشه‌ای[5] و یا کشت استریل نیز مطرح می گردد، ابزاری مهم در مطالعات پایه و کاربردی بوده و دارای کاربردهای تجاری می باشد (رجب‌بیگی و همکاران، 1385؛ سونانداکوماری و همکاران[6]، 2003). یکی از این کاربردها امکان ایجاد گیاهان ترانسژنیک با وارد کردن DNA تقریبا از هر منبع دیگری می‌باشد. شاید اولین قدم در زمینه کشت بافت گیاهی در سال 1756 توسط هنری لوئیس داهامل برداشته گردید، زمانی که وی شاهد تشکیل کالوس[7] در حین مطالعه مواد التیام دهنده زخم‌های گیاهی بود (غضنفری[8]، 1994).

اساس تئوری کشت بافت گیاهی توسط گتلیت هابرلنت از آکادمی علوم آلمان در سال 1902، بعد از آزمایش‌های وی روی کشت تک سلول‌ها پیشنهاد گردید (هابرلنت[9]، 1902). توسعه روش‌های کشت بافت و زیست‌شناسی مولکولی برای تبادل DNA بین موجودات زنده غیر خویشاوند این امکان را می‌دهد که ژن‌های جدیدی از موجودات زنده خارج از سلسله گیاهی به درون گیاهان گیرنده وارد شوند. لذا مطالعه حاضر می‌تواند کمکی جهت مطالعه و واکنش‌های گیاه نعناع فلفلی نسبت به تکنیک‌های مختلف کشت بافت و باززائی این گیاه از طریق کشت بافت و اثر مواد جهش‌زائی همچون اتیل متان سولفانات[10] (EMS) باشد، تا محققین دیگر بتوانند به مطالعه خواص دارویی یا تغییرات لازم در مواد موثره یا فعال (متابولیت‌های ثانویه) و یا مطالعات انتقال ژن در این گیاه بپردازند.

1-1-1 اهمیت موضوع

برای انجام کشت بافت نعناع فلفلی (Mentha piperita) از بخش‌های مختلف گیاه مانند ریشه، برگ، ساقه و گره بهره گیری گردید (سونانداکوماری و همکاران، 2003؛ ساجانا و همکاران[11]، 2011). با در نظر داشتن اینکه روش معمول اصلاح و بهبود تولید متابولیت‌های ثانویه در گیاهان دارویی شامل کاشت آن‌ها در مزرعه و سپس برداشت و استخراج این مواد به روش‌های شیمیایی و غیره با معضلات متعددی نظیر شرایط محیطی و زراعی، صرف زمان، هزینه و بهره گیری نیروی کار زیاد و همچنین خطرنابودی بعضی از گیاهان دارویی کمیاب روبرو می باشد، بهره گیری از روش‌های جدید مانند کشت درون شیشه‌ای (in vitro) ضرورت می‌یابد به همین مقصود اولین بار در سال 1976 توسط زنیک تکنیک کشت سوسپانسیون سلول‌های گیاهی حاوی متابولیت‌های ثانویه انجام گرفت. البته در ارتقاء بیوسنتز متابولیت‌های دارویی در شرایط درون شیشه‌ای اغلب، گیاهانی انتخاب می شوند که بازده تولید متابولیت‌های با ارزش در آن‌ها بالا باشد (باقری و صفاری، 1387).

نعناع فلفلی به عنوان یک گیاه دارویی شناخته می گردد (امیدبیگی، 1384،1389). تاکنون مطالعات زیادی در مورد تعیین مواد موثره نعناع فلفلی صورت گرفته می باشد (کاظم الوندی و شریفان، 1388). موارد مصرف و خواص دارویی آن نیز به خوبی مطالعه شده می باشد اما مطالعات کشت بافت و ایجاد جهش زیاد نبوده می باشد. با در نظر داشتن اینکه تکثیر این گیاه از طریق بذر مشکل می باشد (بدلیل بذور کم و نابارور)، بهترین و سریع‌ترین راه برای داشتن گیاه جهت مصارف صنعتی، کشت بافت می باشد. همچنین با در نظر گرفتن اهمیت و خواص دارویی این گیاه، مطالعات کشت بافت و بهینه‌سازی محیط کشت جهت اهداف مختلف برای این گیاه لازم است.

1-1-2 فرضیات

1- کشت بافت یکی از راه‌های سریع در ازدیاد انبوه نعناع فلفلی می‌باشد.

2- نعناع فلفلی در محیط کشت همواره در دسترس برای اعمال هر گونه اعمال تیمار از قبیل جهش می‌باشد.

3- ایجاد جهش نقطه­ای تا چه میزانی می‌تواند بر روی مواد موثره و میزان اسانس تغییر ایجاد نماید.

1-1-3 اهداف پژوهش

1- آشنایی با تکنیک کشت بافت گیاه دارویی نعناع فلفلی و تکثیر آن در داخل شیشه.

2- بدست آوردن مقدار قابل توجه گیاه در حال رشد برای اعمال جهش نقطه‌ای در نعناع فلفلی.

3- مطالعه تغییر در میزان مواد موثره گیاه در غلظت‌های مختلف ماده جهش‌زای EMS

1-2 کلیات

1-2-1 گیاه شناسی

نعناع فلفلی با نام علمی Mentha piperita L. و بـا نـام عمومی Peppermint ازخانواده نعناعيان یک گیاه علفی چند ساله می باشد که در رده‌بندی گیاهی از تیرهLamiaceae راسته Lamialse و رده Rosidae می‌باشد (فوستر[12]، 1996؛ پیرس[13]، 1999). برگ‌های آن بیضوی ، متقابل ، نوک تیز ، دندانه‌دار کمی پوشیده از کرک به درازای ۷-۴ سانتی‌متر و به عرض ۳-۲ سانتی‌متر می باشد (فلمینگ[14]، 1998). گل‌ها کامل نامنظم، اکثراً دوجنس یا هرمافرودیت و مجتمع به صورت گروهی در روی ساقه و در انتهای ساقه ظاهر می شوند گل‌ها در ماه‌های مرداد و شهریور ظاهر می شوند (امیدبیگی، 1384،1389). رنگ آنها گلی روشن یا کم و بیش ارغوانی مایل به بنفش می‌باشد و به تعداد زیاد نیز در مجاورت یکدیگر به نحوی مجتمع می شوند که مجموعاً در قسمت انتهای ساقه‌ها ، به صورت سنبله‌هایی با شکل ظاهری، بیضوی و نوک تیز جلوه می کند (شکل1-1). بعضی از شاخه‌های این گیاه عقیم و عاری از گل باقی می‌ماند. عمر گل‌ها بسیار کوتاه و مدت کمی پس از تشکیل از گیاه جدا می گردد، میوه کپسول ، کوچک و به رنگ قرمز تیره می باشد (امیدبیگی، 1384،1389).

تعداد صفحه :89

قیمت : چهارده هزار و هفتصد تومان

***

—-

پشتیبانی سایت :        ———-        [email protected]

  • 2
Category: مهندسی کشاورزی - دامپروری | دیدگاه‌ها برای فرمت word : پایان نامه ارشد رشته کشاورزی :توليد موتاسيون در گياه نعناع فلفلی با استفاده از موتاژن EMS- قسمت 2 بسته هستند
آگوست 21

دانلود فایل تحقیق : پایان نامه ارشد رشته زیست شناسی : جداسازی و شناسائی اندوفیت­های گیاهان داروئی بابونه نعناع فلفلی- قسمت 2

ت نتایج قابل قبولی از اثرمثبت آنها در رشد گیاه را نشان داد.

کلمات کلیدی: گیاهان دارویی، اندوفیت، آنتاگونیسمی، باسیلوس

مقدمه

حضور و استقرار باکتری های غیر بیماری زا در بافت های گیاهی به سال 1926 و به تئوری پروتی[1] بر می گردد. بعد از سال 1940 تاکنون گزارشات زیادی در ارتباط با باکتری های اندوفیت بومی در بافت های مختلف گیاهی هست(هالمن و همکاران 1997)[2].

در گذشته تصور می گردید که باکتری های اندوفیت باعث بیماری زایی خفیفی در گیاهان می شوند اما تحقیقات اخیر ثابت نمود که این دسته از باکتری ها قادرهستند رشد گیاه را بهبود بخشیده و سبب افزایش مقاومت علیه بیمارگرهای گیاهی شوند(هالمن و همکاران 1997).

از نظر تکاملی به نظر می رسد که باکتری های اندوفیت حد واسط باکتری های ساپروفیت و باکتری های بیمارگر گیاهی بوده و آنها ساپروفیت هایی اند که توانسته اند خود را در پناهگاهی حفظ نمایند و بدون اینکه میزبان خود را از بین ببرند از مواد موجود در گیاه برای رشد و تکثیر خود بهره گیری نمایند. فسیل ها ارتباط بین گیاهان و اندوفیت ها را نشان می دهند، در نتیجه اندوفیت ها تأثیر مهم و دراز مدتی را در تکامل حیات بر روی زمین بر عهده داشتند.

(هالمن و همکاران 1997).

اندوفیت ها درون گیاه حضور دارند و بیش از 120 سال می باشد که شناخته شده اند. بعد ها آنها را به عنوان میکروارگانیسم هایی که می توان آنها را از سطح سترون گیاه جدا نمود شناختند و در علم زراعت نیز این مفهوم بیشتر باکتری هایی را در بر می گیرد که می توانند از سطح سترون بافت جدا شوند و به گونه عیان به گیاه میزبان آسیب نمی رسانند.

اغلب این باکتری ها از خاک منشاء می گیرند و بایستی آغاز در گیاه کلنیزه شوند که این کلنیزاسیون اکثرا از طریق ترک، زخم، آسیب ریشه انجام می شود که به این مناطق اصطلاحا”نقطه داغ[3] می گویند.

بعد از کلنیزاسیون و ورود باکتری ها به گیاه به سرعت در فضای بین سلولی در ریشه گسترش یافته و سپس سیستم های ژنتیک اختصاصی بین باکتری و گیاه فعال می گردد.

اندوفیت ها در گیاه از فرآیندهای سلولی بهره گیری کرده و از طریق قشر مغز به سایر بافت ها گسترش می یابند که در این فرآیند آنزیم هایی نظیر اندوگلوکانامیس و اندوپلی گالاکتورونیداس را می توان نام برد در این زمان اندوفیت ها می توانند به سرعت در گیاه تکثیر یابند و تعداد خود را افزایش دهند. این باکتری ها قادر به تنظیم سطح اتیلن در گیاه اند و این اقدام را ازدو طریق ،شکستن ACC و یا مهار ACC سنتتاز انجام می دهند.

همان گونه که جانوران و بشر ها به گونه معمول با میکرو ارگانیسم های متنوعی در ارتباط اند و میکروارگانیسم ها در توسعه و تحریک سیستم ایمنی تأثیر مهمی را اعمال می کنند به گونه مشابه باکتری های گیاهی یا اندوفیت ها نیز در تحریک واکنش های دفاعی در گیاه تأثیر دارند و باعث رشد بهتر گیاه از طریق تثبیت نیتروژن، افزایش مواد معدنی در دسترس، تولید 2و3 بوتان دی ال، استوئین که مسئول ارتقاء گیاه اند می شوند.

این باکتری ها با تولید مواد ضد میکروبی مانند ترپونوئید، فلاوونوئید، ایزوفلاوونوئید در گیاه باعث مقاومت گیاه در برابر عامل میکروبی بیماری زا در آن می شوند.

با در نظر داشتن موقعیت جغرافیایی استان گلستان باکتری های بیشماری می توان از خاک این منطقه جدا نمود که بعضی از آنها به صورت اندوفیت می باشند. با در نظر داشتن اینکه در مناطق شمالی بیشتر منطقه قابل کشت می باشد و از طرفی این باکتری ها تأثیر بسیار مهمی را در رشد گیاه و کنترل عوامل بیماری زا در گیاهان اعمال می کنند کمک بسیار بزرگی می تواند در بخش کشاورزی باشد. البته با در نظر داشتن اینکه در ایران کمتر به این مسئله پرداخته شده می باشد پس مطالعه روی این موضوع می تواند بسیار مهم باشد.

اهمیت و ضرورت پژوهش

  1. عدم اطلاعات قبلی در زمینه جداسازی و شناسائی باکتری های اندوفیت از گیاهان داروئی در استان
  2. مطالعه خاصیت ضد میکروبی جدایه های باکتریایی اندوفیت های جدا شده از گیاهان در برابر پاتوژن های قارچی
  3. مطالعه افزایش توان رشدی در گیاهان حاوی اندوفیت ها پیش روی گیاهان فاقد اندوفیت ها و بهره گیری از آنها به جای کود های شیمیایی

اهداف پژوهش :

  1. اندوفیت های 3 گیاه داروئی به نام های نعناع فلفلی، مارچوبه و بابونه جداسازی و شناسائی شدند.

2.اثرات ضد قارچی اندوفیت های جداشده مطالعه شدند.

3.توانائی اندوفیت های جدا شده روی افزایش رشد گیاه مطالعه گردید.

فصل اول

کلیات

1-1- اندوفیت

1-1-1- مقدمه

         حضور و استقرار باکتری های غیربیماری زا در بافت های گیاهی به سال 1926 و به تئوری پروتی[4] برمی گردد.

بعدازسال 1940 تاکنون گزارشات زیادی درارتباط با باکتری های اندوفیت به عنوان عوامل بیماری زایی خفیف درگیاهان هست، اما تحقیقات اخیرثابت نمودکه این دسته از باکتری قادرهستند رشد گیاه را بهبود بخشیده وسبب افزایش مقاومت علیه بیمارگرهای گیاهی شوند. باکتری های اندوفیت دراکثر گونه های گیاهی حضور دارند.

از نظر تکاملی باکتری های اندوفیت حد واسط باکتری های ساپروفیت و باکتری های بیمارگر گیاهی بوده و در واقع ساپروفیتی اند که به سمت بیمارگری تکامل یافته اند و در واقع اندوفیت ها از بیمارگرهای گیاهی تکامل یافته تر بوده و توانسته اند خود را در پناهگاهی حفظ نمایند، بدون آنکه میزبان خود را از بین ببرنداز مواد موجود در گیاه برای رشد و تکثیر خوداستفاده می نمایند(هالمن و همکاران 1997).

این میکروارگانیسم هادر قرن نوزدهم شناخته شده اند اما مطالعه قابل توجهی روی آنها صورت نگرفت. اندوفیت ها میکروارگانیسم هایی اند که حداقل یک مرحله از چرخه ی زندگی خود را درون گیاهان سپری می کنند. تعاریف مختلفی برای اندوفیت هست:

کادو[5] عنوان می کند که اندوفیت های باکتریایی در بافت های زنده گیاهی ساکن اند، بدون آنکه به گیاه صدمه ای بزنند.

کوئیزیل[6] عنوان می کند که اندوفیت ها قادراند همزیستی داخلی با گیاه مستقر نموده و یک محیط سودمند اکولوژیکی را به واسطه حضور اندونیت ایجاد کنند که گیاه به واسطه ی آن تنش های محیطی را تحمل نموده یا سبب بهبودافزایش رشد گیاه شوند.

ویلسون[7] عنوان می کند باکتری های اندوفیت بافت های غیر زنده ی گیاه را مورد تهاجم قرار داده اما علائمی از بیماری را در گیاه ایجاد نمی کند(هالمن و همکاران 1997).

باکتری های اندوفیت باکتری هایی اند با منشا محیط اطراف ریشه (خاک) که حداقل بخشی از چرخه ی زندگی خود را در گیاه به سر می برند و توانسته اند خود را در پناهگاهی حفظ نمایند بدون آنکه به میزبان خود آسیب بزننداز مواد موجود در گیاه برای رشد و تکثیر خود بهره گیری می کنند و در تعامل باعث افزایش رشد و تحمل تنش های محیطی برای گیاه می شوند.(پابلو و همکاران 2008)[8].

1-1-2- اکولوژی باکتری های اندوفیت

اندوفیت بودن یک مزیت اکولوژیکی می باشد که بعضی از باکتری ها قادراند بافت های درونی گیاه را کلنیزه نمایند این در حالی می باشد که تعدادی از باکتری ها قادراند گیاه را فقط به صورت      اپی فیت کلنیزه نمایند.

محیط داخلی گیاه یک محیط حفاظت شده و یکنواختی را برای میکروارگانیسم ها فراهم می کند. عواملی مثل درجه حرارت، اشعه ماوراء بنفش و رقابت های میکروبی مانند عواملی اند که بقاء طولانی مدت باکتری ها را محدود می سازند. استقرار و بقاء یک جمعیت باکتریایی درون بافت گیاه تحت تاثیر عوامل قرار می گیردکه سلامتی گیاه را نیزتحت تاثیر قرار می دهند(هالمن و همکاران 1997)[9].

تعامل بین گیاه واندوفیت مستلزم آن می باشد که هر دو بتوانند موانع فیزیکی و شیمیایی را که بر سر راه دارند با موفقیت پشت سر نهند تا این ارتباط شکل گیرد(پابلو و همکاران 2008).

1-1-3- منشاء باکتری های اندوفیت

بیشترین پرسش هایی که در ارتباط با باکتری های اندوفیتی مطرح می باشد این می باشد که منشا باکتری های اندوفیتی از کجاست و چگونه وارد گیاه می شوند؟(هالمن و همکاران 1997)

شروع با این فرض می باشد که اندوفیت ازخاکی که گیاه میزبان در حال رشداست سرچشمه می گیرد و فاکتورهای خاک کلنیزه شدن باکتری در گیاه را مشخص می کند(پابلو و همکاران 2008).

در واقع باکتری های اپی فیت، فیلوسفر و ریزوسفر به عنوان منبع باکتری های اندوفیت ذکر شوند. تبادل جمعیتی بین جمعیت های باکتریایی خارج و داخل گیاه از طریق روزنه ها انجام می شود. پس باکتری هایی وجود دارندکه قادراند به هر دوصورت اپی فیت و اندوفیت گیاه را کلنیزه کنند(هالمن و همکاران 1997)[10].

فاکتورهایی نظیر ژنوتیپ گیاه، مرحله رشد، وضعیت فیزیولوژیکی، نوع بافت گیاهی، شرایط محیطی (منظورخاک) وشیوه های کشاورزی اغلب تعیین کننده ی کلنیزاسیون اندوفیت ها و جامعه اندوسفری می باشند. علاوه براین موارد صفات ذاتی باکتریایی نیز در کلنیزاسیون و تنوع اندوفیتی تأثیر مهمی را بازی می کند.

به عنوان مثال دیده شده که نسبت باکتری هایی که حرکت سوارمینگ دارند واز داخل ریشه ی گیاه گندم جدا شدند پنج برابر بیشتراز تعداد آنها در ریزوسفر خاک بوده و این نشان می دهد که باکتری هایی که حرکت سوارمینگ داشتند با حرکت خود از طریق کموتاکسی جذب ریشه شده و موفق به تشکیل میکروکلنی شدند(پابلو و همکاران 2008)[11].

در مطالعات میکروسکوپ الکترونی بذر برنج نظاره گردید که جمعیت پایینی از باکتری های اندوفیت در محل های حفاظت شده ای در پوشش بذر، پوسته های بذری، بافت های جنینی حضور دارند، باکتری های اندوفیت این مکان ها را از میان شکاف های ریزی که در پوشش های بذر هست کلنیزه می کنند.

زمان جوانه زنی بذر، باکتری ریشه را کلنیزه نمود و در استیل ریشه بالاترین تمرکز را دارد. در تیمار بذری باباکتری اندوفیت، رادیکال های ریشه که تازه از پوشش بذری خارج شوند کلنیزه می شوند. کلنیزه شدن بافت توسط اندوفیت ها، مهاجرت باکتری ها از میان شکاف های تشکیل شده، در اثر جوانه زنی بذر شروع شده و وارد اندوسپرم می گردد وبدین صورت در رادیکال و سایر قسمت های گیاه فراگیر می گردد(موخاپودای و همکاران 1996)[12].

ریزوسفرخاک منبع اولیه باکتری های اندوفیت اند. به تعبیری اکثر باکتری های اندوفیت از ریزوسفر منشا گرفته اند و این میکروارگانیسم ها از ریزوسفر به ریزوپلان و سپس به اپیدرم و پوست می آیند.

پس ترکیب جمعیت اندوفیت ها بستگی به ترکیب جمعیتی باکتری های مستقر در ریزوسفر گیاه دارد(استورز 1995).

استورز[13] باکتری های اندوفیت غده های بذری سیب زمینی سالم را شناسائی نمود و نشان داد، گونه هایی که غده های سالم را به صورت داخلی کلنیزه می نمایند از ریزوسفر گیاه منشا گرفتند، به تعبیری غالب ترین گونه های جدا شده از خاک اطراف ریشه همان گونه هایی بودند که از داخل غده ها جدا شدند(کوادت هالمن و همکاران 1997)[14].

تعداد صفحه :91

قیمت : چهارده هزار و هفتصد تومان

***

—-

پشتیبانی سایت :        ———-        [email protected]

  • 2
Category: زیست شناسی | دیدگاه‌ها برای دانلود فایل تحقیق : پایان نامه ارشد رشته زیست شناسی : جداسازی و شناسائی اندوفیت­های گیاهان داروئی بابونه نعناع فلفلی- قسمت 2 بسته هستند
ژانویه 19

فرمت word : پایان نامه ارشد رشته کشاورزی :توليد موتاسيون در گياه نعناع فلفلی با استفاده از موتاژن EMS

با عنوان : توليد موتاسيون در گياه نعناع فلفلی با بهره گیری از موتاژن EMS

در ادامه مطلب می توانید تکه هایی از ابتدای این پایان نامه را بخوانید

و در صورت نیاز به متن کامل آن می توانید از لینک پرداخت و دانلود آنی برای خرید این پایان نامه اقدام نمائید.

!–more–

دانشگاه آزاد اسلامی

واحد دامغان

دانشکده‌کشاورزی

 پايان نامه برای دريافت درجه کارشناسی ارشد

رشته مهندسی کشاورزی (بيوتکنولوژی کشاورزی)

گرايش کشاورزی

عنوان

توليد موتاسيون در گياه نعناع فلفلی با بهره گیری از موتاژن EMS

استاد راهنما

دکترسيدکمال کاظمی‌تبار

استاد مشاور

دکترجعفرمسعودسينکی

برای رعایت حریم خصوصی نام نگارنده درج نمی گردد

تکه هایی از متن به عنوان نمونه : (ممکن می باشد هنگام انتقال از فایل اصلی به داخل سایت بعضی متون به هم بریزد یا بعضی نمادها و اشکال درج نشود اما در فایل دانلودی همه چیز مرتب و کامل می باشد)

فهرست مطالب
صفحه عنوان
1 چکیده……………………………………………………………………………………………………………………………
  فصل اول: مقدمه و کلیات
2 1-1 مقدمه……………………………………………………………………………………………………………………..
3 1-1-1 اهمیت موضوع…………………………………………………………………………………………………….
4 1-1-2 فرضیات………………………………………………………………………………………………………………
4 1-1-3 اهداف پژوهش…………………………………………………………………………………………………….
5 1-2 کلیات……………………………………………………………………………………………………………………..
5 1-2-1 گیاه شناسی………………………………………………………………………………………………………….
6 1-2-2 نیازهای اکولوژی………………………………………………………………………………………………….
6 1-2-3 خواستگاه و دامنه انتشار………………………………………………………………………………………..
7 1-2-4 خواص دارویی…………………………………………………………………………………………………….
7 1-2-5 موارد بهره گیری……………………………………………………………………………………………………….
8 1-2-6 مواد موثره و اجزاء اسانس……………………………………………………………………………………..
8 1-2-7 کشت بافت………………………………………………………………………………………………………….
9 1-2-7-1 انواع کشت بافت گیاهی……………………………………………………………………………………
10 1-2-7-2 مطالعه اثرات فاکتورهای مختلف در محیط کشت…………………………………………………
10 1-2-7-3 نمک‌های غیرآلی………………………………………………………………………………………………
11 1-2-7-4 ویتامین‌ها………………………………………………………………………………………………………..
11 1-2-7-5 منبع انرژی………………………………………………………………………………………………………
11 1-2-7-6 میواینوسیتول……………………………………………………………………………………………………
12 1-2-7-7 عوامل فیزیکی………………………………………………………………………………………………….
12 1-2-7-8 ریزنمونه………………………………………………………………………………………………………….
12 1-2-7-9 چگونگی انتخاب محیط کشت…………………………………………………………………………..
13 1-2-7-10 ریزازدیادی گیاهان از طریق کشت بافت……………………………………………………………
13 1-2-7-11ریشه‌زائی……………………………………………………………………………………………………….
14 1-2-8 تعریف موتاسیون (جهش) ……………………………………………………………………………………
صفحه عنوان
14 1-2-8-1 تاریخچه بهره گیری از موتاسیون…………………………………………………………………………….
15 1-2-8-2 سطوح ایجاد موتاسیون……………………………………………………………………………………..
15 1-2-8-3 انواع موتاسیون…………………………………………………………………………………………………
16 1-2-8-4 موتاژن (عامل جهش‌زا) ……………………………………………………………………………………
16 1-2-8-4-1 انواع موتاژن………………………………………………………………………………………………..
16 1-2-8-4-2 عوامل شیمیایی جهش‌زا………………………………………………………………………………..
18 1-2-8-4-3 مواد گیاهی مورد تیمار………………………………………………………………………………….
18 1-2-8-4-4 اصلاح به روش موتاسیون……………………………………………………………………………..
19 1-2-8-4-5 اهمیت موتاسیون در اصلاح نباتات. ……………………………………………………………….
19 1-2-8-4-6 موفقیت موتاسیون………………………………………………………………………………………..
19 1-2-8-4-7 روش‌های جدید بهره گیری از موتاسیون……………………………………………………………..
20 1-2-8-4-8 هدف موتاسیون مصنوعی………………………………………………………………………………
21 1-2-9 روغن‌های اسانس…………………………………………………………………………………………………
22 1-2-9-1 جداسازی و شناسایی مواد تشکیل دهنده روغن اسانسی گیاه…………………………………
            فصل دوم: مروری بر تحقیقات انجام شده
23 2-1 کشت بافت……………………………………………………………………………………………………………..
24 2-2 اثر موتاژن‌ها در ایجاد تنوع در صفات مختلف………………………………………………………………
26 2-3 اثر موتاسیون اتیل متیل سولفانات در ایجاد تنوع در سطوح مختلف…………………………………
            فصل سوم: مواد و روش‌ها
32 3-1 مواد گیاهی………………………………………………………………………………………………………………
32 3-2 کشت بافت……………………………………………………………………………………………………………..
32 3-2-1 تهیه محلول ذخیره محیط‌های کشت……………………………………………………………………….
33 3-2-1-1 تهیه محلول ذخیره ماکرو…………………………………………………………………………………..
34 3-2-1-2 تهیه محلول ذخیره عناصر میکرو………………………………………………………………………..
34 3-2-1-3 تهیه محلول ذخیره آهن-سدیم…………………………………………………………………………..
35 3-2-1-4 تهیه محلول ذخیره ویتامین………………………………………………………………………………..
35 3-2-2 تهیه محیط کشت………………………………………………………………………………………………….
صفحه عنوان
36
برای دانلود فایل ورد متن کامل اینجا کلیک کنید
3-2-3 ضدعفونی نمونه‌های گیاهی………………………………………………………………………………….. 36

3-2-3-1 ضدعفونی اندام گیاه…………………………………………………………………………………………. 37

3-2-4 تهیه ریزنمونه………………………………………………………………………………………………………. 37

3-2-5 بهینه سازی محیط کشت………………………………………………………………………………………. 37

3-2-6 مطالعه نمونه‌های کشت شده………………………………………………………………………………… 38

3-2-7 تیمارهای مورد بهره گیری…………………………………………………………………………………………. 38

3-2-7-1 روش تهیه استوک EMS …………………………………………………………………………………
شما می توانید تکه های دیگری از این مطلب را در شماره بندی انتهای صفحه بخوانید              
39

3-2-7-2 روش اعمال تیمارهای EMS در گیاه کشت بافتی………………………………………………. 39

3-2-7-3 روش اعمال تیمارهای EMS در مزرعه…………………………………………………………….. 39

3-2-7-4 روش شستشوی تیمارها…………………………………………………………………………………… 40

3-3 استخراج مواد موثره گیاهی……………………………………………………………………………………….. 40

3-3-1 روش‌های استخراج اسانس……………………………………………………………………………………. 40

3-4 واکاوی اجزاء اسانس…………………………………………………………………………………………………… 41

3-5 آنالیزهای آماری……………………………………………………………………………………………………….  

         فصل چهارم: نتایج و بحث 42

4-1 مطالعه نمونه‌های کشت بافتی……………………………………………………………………………………. 45

4-2 تاثیر EMS برروی خصوصیات مرفولوژیکی گیاه……………………………………………………….. 46

4-2-1 اثر دوز EMS و زمان برروی طول ساقه………………………………………………………………… 47

4-2-2 اثر دوز EMS و زمان برروی طول ریشه……………………………………………………………….. 47

4-2-3 اثر دوز EMS و زمان برروی تعداد برگ……………………………………………………………….. 48

4-2-4 اثر دوز EMS و زمان برروی تعداد ریشه جانبی…………………………………………………….. 49

4-2-5 اثر دوز EMS و زمان برروی تعداد جوانه……………………………………………………………… 50

4-2-6 اثر دوز EMS و زمان برروی متوسط طول برگ……………………………………………………… 51

4-2-7 اثر دوز EMS و زمان برروی تعداد ریشه………………………………………………………………. 51

4-3 ضریب همبستگی بین صفات و خصوصیات مورد مطالعه…………………………………………….. 52

4-4 استخراج اسانس………………………………………………………………………………………………………. 52

4-4-1 واکاوی و شناسایی کمی و کیفی اجزای موجود در اسانس……………………………………………. صفحه

عنوان 53

4-4-2 نتایج آزمایشگاهی………………………………………………………………………………………………… 53

4-4-3 نتایج مربوط به طیف کروماتوگرام گازی گیاه…………………………………………………………..
شما می توانید مطالب مشابه این مطلب را با جستجو در همین سایت بخوانید                     
54

4-4-4 ترکیبات تشکیل دهنده اسانس………………………………………………………………………………..  

         فصل پنجم: نتیجه‌گیری 55

5-1 بحث……………………………………………………………………………………………………………………… 55

5-1-1 کشت بافت گیاهی……………………………………………………………………………………………….. 56

5-1-2 اثرات موتاژن EMS …………………………………………………………………………………………… 60

5-2 نتیجه‌گیری……………………………………………………………………………………………………………… 61

5-3 پیشنهادات………………………………………………………………………………………………………………. 62

فهرست منابع فارسی……………………………………………………………………………………………………….. 64

فهرست منابع انگلیسی…………………………………………………………………………………………………….. 71

پیوست‌ها……………………………………………………………………………………………………………………….. 75

چکیده انگلیسی……………………………………………………………………………………………………………….

چکیده

نعناع فلفلی با نام علمی Mentha piperitaیکی از انواع گیاهان دارویی می‌باشد که به دلیل تولید اسانس‌های با ارزش در صنایع داروسازی و بهداشتی بهره گیری‌های فراوانی دارد. بهره گیری از مواد موتاسیون‌زا از قبیل EMS می‌تواند تغییرات جهش‌زای نقطه‌ای در گیاه ایجاد کند که در نهایت منجر به ظهور فنوتیپ جدید در این گیاه با ارزش شوید. لذا این پژوهش با انجام تیمارهای متعدد از غلظت‌های مختلف EMS روی سرشاخه‌های رشد یافته در محیط کشت MS بدون هورمون و با غلظت‌های 0/0% (به عنوان شاهد)، 05/0% و 01/0% و 005/0% از EMS و مدت زمان‌های مختلف (24 و48 ساعت) و همچنین در قسمت مزرعه‌ای نیز از همین غلظت‌ها و زمان‌ها بهره گیری گردید. ارزیابی‌ در داخل لوله آزمایش و مزرعه بطور همزمان انجام گرفت. پس از انتفال و رشد و نمو نمونه‌ها در شرایط in vitro، تیمارها با ماده جهش‌زا اتیل متان سولفانات مورد مطالعه قرار گرفتند. فاکتورهای مختلف مورفولوژیکی از قبیل طول ساقه و تعداد ریشه رونده جانبی در سطح 1% و تعداد برگ و تعداد جوانه در ساقه در سطح 5% پاسخ معنی‌داری را نشان دادند. نتایج اين پژوهش نشان داد كه بهره گیری از مواد جهش‌زا در محیط کشت MS تأثیر بسزایی در تغییر فنوتیپی این گیاه دارویی دارد. غلظت 01/0% EMS بهترین نتیجه معنی‌دار را در سطح 1% و از کشت ریزنمونه‌های که شامل جوانه‌های جانبی و انتهایی بوده‌اند به‌دست آورده که برروی خصوصیاتی همچون طول ساقه، تعداد برگ و تعداد جوانه جانبی اثر داشت. واکاوی اسانس تیمارها نیز انجام گردید که نتیجه آن بی‌اثر بودن این ماده اتیل متان سولفانات روی مواد اجراء

Category: مهندسی کشاورزی - دامپروری | دیدگاه‌ها برای فرمت word : پایان نامه ارشد رشته کشاورزی :توليد موتاسيون در گياه نعناع فلفلی با استفاده از موتاژن EMS بسته هستند
ژانویه 19

دانلود فایل تحقیق : پایان نامه ارشد رشته زیست شناسی : جداسازی و شناسائی اندوفیت­های گیاهان داروئی بابونه نعناع فلفلی

با عنوان : جداسازی و شناسائی اندوفیت­های گیاهان داروئی بابونه نعناع فلفلی

در ادامه مطلب می توانید تکه هایی از ابتدای این پایان نامه را بخوانید

و در صورت نیاز به متن کامل آن می توانید از لینک پرداخت و دانلود آنی برای خرید این پایان نامه اقدام نمائید.

!–more–

دانشگاه آزاد اسلامی

واحد دامغان

دانشکده علوم پایه

شما می توانید تکه های دیگری از این مطلب را در شماره بندی انتهای صفحه بخوانید              

پایان نامه برای دریافت درجه کارشناسی ارشد «M.Sc»

رشته: زیست شناسی

گرایش: میکروب شناسی

عنوان:

جداسازی و شناسائی اندوفیت­های گیاهان داروئی بابونه نعناع فلفلی مارچوبه بومی استان گلستان و تاثیر آنها در گیاهان

استاد راهنما:

دکتر محمد حسین ارزانش

استاد مشاور:

دکتر رضا نظام زاده

برای رعایت حریم خصوصی نام نگارنده درج نمی گردد

تکه هایی از متن به عنوان نمونه : (ممکن می باشد هنگام انتقال از فایل اصلی به داخل سایت بعضی متون به هم بریزد یا بعضی نمادها و اشکال درج نشود اما در فایل دانلودی همه چیز مرتب و کامل می باشد)

 

عنوان صفحه
چکیده………………………………………………………………………………………………………………………………………… 1
مقدمه………………………………………………………………………………………………………………………………………….. 2
اهمیت و ضرورت پژوهش 3
اهداف پژوهش 3
فصل اول- کلیات  
1-1-اندوفیت……………………………………………………………………………………………………………………………… 4
1-1-1- مقدمه……………………………………………………………………………………………………………………………. 4
1-1-2- اکولوژی باکتری های اندوفیت………………………………………………………………………………………….. 5
1-2-3- منشاء باکتری های اندوفیت……………………………………………………………………………………………… 5
1-1-4- نحوه ی ورود باکتری های اندوفیت به درون بافت های گیاهی…………………………………………….. 8
1-1-5- حرکت باکتری های اندوفیت در بافت های گیاهی………………………………………………………………. 10
1-1-6 – محل استقرار باکتری های اندوفیت…………………………………………………………………………………… 11
1-1-7 – تراکم جمعیت باکتری های اندوفیت…………………………………………………………………………………. 12
1-1-7-1- فاکتورهای زنده………………………………………………………………………………………………………….. 13
1-1-7-1-1- میکروارگانیسم های همراه با گیاه……………………………………………………………………………… 13
1-1-7-1-1-1- باکتری ها و قارچ ها……………………………………………………………………………………………. 13
1-1-7-1-1-2- ویروس ها…………………………………………………………………………………………………………. 13
1-1-7-1-1-3- نماتد ها…………………………………………………………………………………………………………….. 13
1-1-7-1-2- ژنوتیپ گیاه…………………………………………………………………………………………………………… 14
1-1-7-2- فاکتورهای غیر زنده…………………………………………………………………………………………………… 14
1-1-8- اثرات مفید باکتری های اندوفیت گیاهی…………………………………………………………………………….. 15
1-1-8-1- افزایش رشد گیاه………………………………………………………………………………………………………… 15
1-1-8-2- کنترل بیولوژیکی بیمارگرهای گیاهی……………………………………………………………………………… 17
1-1-8-3- بهره گیری ازاندوفیت ها در مهندسی ژنتیک………………………………………………………………………… 17
1-1-8-4- افزایش تولید مواد دارویی توسط گیاه……………………………………………………………………………. 17
1-1-9- نحوه ی بهره گیری از باکتری های اندوفیت……………………………………………………………………………. 18
شما می توانید مطالب مشابه این مطلب را با جستجو در همین سایت بخوانید                     
1-2- نعناع فلفلی…………………………………………………………………………………………………………………………

18 1-2-1- ترکیبات………………………………………………………………………………………………………………………….

19 1-2-2- خاستگاه و پراکنش…………………………………………………………………………………………………………..

19 1-2-3- بهره گیری های دارویی…………………………………………………………………………………………………………

19 1-3- مارچوبه……………………………………………………………………………………………………………………………..

19 1-3-1- خاستگاه و پراکنش…………………………………………………………………………………………………………..

20 1-3-2- بهره گیری های دارویی…………………………………………………………………………………………………………

20 1-4- بابونه…………………………………………………………………………………………………………………………………

20 1-4-1- ترکیبات شیمیایی…………………………………………………………………………………………………………….

20 1-4-2- خواص دارویی و درمانی………………………………………………………………………………………………….

20 1-5- باسیلوس…………………………………………………………………………………………………………………………….

21 1-5-1- مقدمه…………………………………………………………………………………………………………………………….

21 1-5-2- باسیلوس های خاک و ویژگی آنها……………………………………………………………………………………..

24 1-5-3- رنگ آمیزی گرم برای تشخیص باسیلوس ها……………………………………………………………………….

24 1-6- قارچ ها………………………………………………………………………………………………………………………………

24 1-6-1- معرفی کلی ماهیت قارچ ها………………………………………………………………………………………………

24 1-6-2- اهمیت بالینی قارچ ها………………………………………………………………………………………………………

25 1-6-3- بیماری زایی قارچ ها………………………………………………………………………………………………………..

26 1-6-3-1- کنترل بیماری های قارچی…………………………………………………………………………………………….

26 1-6-4- معرفی قارچ های مورد آزمایش…………………………………………………………………………………………

26 1-6-4-1- آسپرژیلوس های بیماری زا…………………………………………………………………………………………..

26 1-6-4-2- فوزاریوم…………………………………………………………………………………………………………………….

27 1-6-4-3- آلترناریا………………………………………………………………………………………………………………………

27 1-6-4-4- موکور………………………………………………………………………………………………………………………..

28 فصل دوم : مروری برمطالعات گذشته

  فصل سوم : مواد و روش ها

  3-1- تجهیزات و دستگاه ها…………………………………………………………………………………………………………..

33 3-2- انواع و ترکیبات محیط کشت های مورد بهره گیری………………………………………………………………………

34 3-3- نوع مطالعه و روش نمونه گیری…………………………………………………………………………………………….

34 3-4- وسایل نمونه یری……………………………………………………………………………………………………………….

34 3-5- وسایل آزمایشگاهی…………………………………………………………………………………………………………….

34 3-6- انتخاب محیط کشت غربالگری…………………………………………………………………………………………….

34 3-7- جداسازی باکتری های اندوفیت از ریشه گیاهان دارویی……………………………………………………………

35 3-7-1- خالص سازی کشت های باکتریایی…………………………………………………………………………………….

35 3-8- شناسایی مقدماتی جنس و گونه ی جدایه های باکتریایی…………………………………………………………..

34 3-8-1- مطالعه توانایی رشد در غلظت های مختلف Nacl………………………………………………………………

36 3-8-2- مطالعه فعالیت آنزیمی………………………………………………………………………………………………………

36 3-8-2-1- فعالیت اوره آزی………………………………………………………………………………………………………….

36 3-8-3- مطالعه فعالیت تجزیه ای…………………………………………………………………………………………………..

36 3-8-3-1- تجزیه نشاسته……………………………………………………………………………………………………………..

36 3-9- شناسایی تکمیلی(شناسایی مولکولی با روش ریبوتایپینگ)…………………………………………………………

37 3-9-1- شرایط PCR………………………………………………………………………………………………………………….

38 3-9-2- تعیین توالی DNA………………………………………………………………………………………………………..

39 3-10- آزمون بازدارندگی رشد عوامل بیماری زای گیاهی………………………………………………………………….

39 3-10-1- تهیه سوسپانسیون باکتری ها……………………………………………………………………………………………

39 3-11- اثر تلقیح باکتری های اندوفیت روی پارامتر رویشی گیاه…………………………………………………………

40 3-11-1- مرحله کاشت………………………………………………………………………………………………………………..

40 3-11-2- مرحله داشت و تنک کردن……………………………………………………………………………………………..

41 3-12- اندازه گیری طولی گیاه……………………………………………………………………………………………………….

41 فصل چهارم : نتایج

  4-1- جداسازی باکتری های اندوفیت از ریشه گیاهان دارویی……………………………………………………………

42 4-2- نتایج تست های بیو شیمیایی…………………………………………………………………………………………………

44 4-3- تعیین توالی محصولات نهایی PCR………………………………………………………………………………………

45 4-3-1- نتایج حاصل از سکوئنسینگ ژن 16 s rDNA باکتری……………………………………………………….

45 4-4- نتایج آنتاگونیسمی بدست آمده از سویه های باسیلوس علیه قارچ های مورد آزمایش……………………

58 4-4-1- نتایج اثر ضد قارچی علیه آسپرژیلوس نایجر……………………………………………………………………….

59 4-4-2- نتایج اثر ضد قارچی علیه فوزاریوم اکسیپوروم…………………………………………………………………….

60 4-4-3- نتایج اثر ضد فارچی علیه آلترناریا آلترناتا……………………………………………………………………………

62 4-4-4- نتایج اثر ضد قارچی علیه موکور………………………………………………………………………………………..

63 4-5- نتایج اندازه گیری رشد طولی گیاه………………………………………………………………………………………….

65 4-5-1- نتایج اندازه گیری رشد طولی در گیاه مارچوبه…………………………………………………………………….

66 4-5-2- نتایج اندازه گیری رشد طولی در گیاه نعناع فلفلی………………………………………………………………..

67 منابع……………………………………………………………………………………………………………………………………………

72

چکیده

اندوفیت ها میکروارگانیسم هایی اند که حداقل بخشی از زندگی خود را در گیاه به سر می برند. آنها از گیاه سود می برند و از مواد مغذی گیاه بهره گیری می کند و گیاه نیز به نوبه ی خود با کاهش استرس وافزایش رشد از این تعامل سود می برد. در گذشته تصور می گردید که باکتری های اندوفیت باعث بیماری زایی خفیفی در گیاهان می شوند اما تحقیقات اخیر ثابت نمود که این دسته از باکتری ها قادر هستند رشد گیاه را بهبود بخشیده و سبب افزایش مقاومت علیه بیمارگرهای گیاهی شوند. در این مطالعه به جداسازی اندوفیت های سه گیاه داروئی به نام های نعناع فلفلی، بابونه و مارچوبه پرداخته گردید که نمونه گیاهان از سه منطقه استان گلستان جمع آوری گردید. نتایج حاصل از شناسایی، سویه های جدا شده را در جنس باسیلوس قرار داد. شش باکتری اندوفیت (هر گیاه دو اندوفیت) جداشد. اندوفیت های جدا شده از نظر پتانسیل ضد قارچی علیه چهار قارچ بنام فوزاریوم اکسی پوروم، آسپرژیلوس نایجر، آلترناریا آلترناتا و موکور مورد مطالعه قرار گرفتندکه همگی آنها اثر ضد قارچی نشان دادند. در بین آنها اندوفیت های موجود در نعناع فلفلی بیشترین اثرضد قارچی را روی عوامل بیماری زای گیاهی نشان داد. همین گونه اثر آنها در رشد گیاه نیز مطالعه گردید

Category: زیست شناسی | دیدگاه‌ها برای دانلود فایل تحقیق : پایان نامه ارشد رشته زیست شناسی : جداسازی و شناسائی اندوفیت­های گیاهان داروئی بابونه نعناع فلفلی بسته هستند